Fragen zu Versuch 2 (Protokoll)

[freaky_babyshi]

Hallo,

ich bin gerade am Protokollschreiben für den 2. Versuch. Leider gibt es ein paar Unklarheiten:

1.) Teilversuch 1: Praktisch lässt sich anhand unserer Daten keine Stöchiometrie nachweisen. Falls jedoch theoretisch betrachtet eine vorhanden sein sollte, wo würde sich diese finden lassen?

2.) Teilversuch 2: Wie berechne ich die spezifische Aktivität der ADH gegenüber Sorbinalkohol? Ist mit Tangentenverfahren gemeint, dass der Ansteig der spezifischen Aktivität entspricht? Falls ja, was muss ich gegen was auftragen und wie lässt sich der Wert erhöhen?

3.) Teilversuch 3: Wie kann man die Aktivität der Proteasen mit einem natürlichen Substrat bestimmen?

Danke im Voraus!

[itac.cati]

1.) 1:1:1
2.) du nimmst die ersten messpunkte aus teilversuch 1 und legst mittels linearer regression eine gerade hinein. deren anstieg ist dE/min...also, dass was dir sonst immer das photometer angezeigt hat. ich hab das für alle drei stoffe gemacht also NADH, sorbinalkohol und sorbinaldehyd. und anschließend hab ich ganz normal aus dE/min die aktivität berechnet bzw. halt graphisch ermittelt ...und aus den drei aktivitäten hab ich dann den mittelwert gebildet und ihn mit ADH ggü. Ethanol veglichen. es reicht aber vllt. auch, wenn du es für einen stoff machst
3.)z.b. protein-ligand-ww --> bradford-test -->extinktionssabnahme da substrat verbraucht wird

[Robert]

zu drittens: SDS-Page / GPC

[freaky_babyshi]

Vielen Dank für eure Hilfe!

Ich habe es nun mittel Tangentenverfahren versucht, glaube aber, dass irgendwo immer noch ein Fehler liegt...
Hier meine Rechnung:

Tangentenverfahren: Anstieg m=Reaktionsgeschwindigkeit in dE/min

m=dy/yx y1=0,827 x1=2
y2=0,776 x2=3

m=0,051=dE/min /:22cm²/µmol(enstpricht ε(Alkohol))
Reaktionsgeschwindigkeit=0,00232µmol/ml*min

15µl ADH unverdünnt
c(ADH)=1mg/ml → Gehalt an ADH=0,015mg

v0=0,00232µmol/ml*min →2ml: 0,00464µmol/min=0,00464U

spezifische Aktivität=U/mg: 0,00464U/0,015mg=0,31U/mg


Ist diese korrekt und liegt es am falsch ermittelten Anstieg oder was ist genau falsch?